综合丨 基因工程ppt(基因工程ppt课件)
2023年03月03日丨佚名丨分类: 综合大家好,今天来为大家解答关于基因工程ppt这个问题的知识,还有对于基因工程ppt课件也是一样,很多人还不知道是什么意思,今天就让我来为大家分享这个问题,现在让我们一起来看看吧!
1请问谁有现代分子生物学和基因工程的课件,PPT或者WORD都行
这给出几个,更多的可以到百度文库里搜索,很多,应该可以满足你的需要。
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2谁能帮我做一份关于转基因的危害的PPT
美国新闻发布《转基因是人类的公敌》《转基因:美国的底线》
危害人体健康2009年5月,美国环境医学科学研究院推出报告称:“一些动物实验表明,食用转基因食品有严重损害健康的风险,包括不育,免疫问题,加速老化,胰岛素的调节和主要脏腑及胃肠系统的改变”。美国科学院环境医学研究院得出的结论引起了轰动。报告发布后,美国卫生部2009年底也发表科学论文,指明转基因食品可对内脏造成伤害。据美国国家科学基金会的调研报告显示,多数民众对转基因持有负面态度和怀疑态度。
其实,早在2008年,美国科学家便证实了长时间喂食转基因玉米的小白鼠免疫系统会受到损害,该研究成果发表在同年《农业与食品化学》杂志上。同年4月,美国政府主管食品药品的部门FDA宣布撤消它在数年前颁布的CRY9C转基因玉米种植的工业指南,主要原因之一,就是该转基因作物对人类健康安全有严重威胁。世界著名生物学家普什帕米巴尔加在审查了600多个科学期刊后得出结论:转基因生物是令美国人健康急剧恶化的一大因素。
产生超级杂草不下十种“超级杂草”正在美国22个州至少上百万公顷农田中肆虐。这些农田的共同特点是,都种植了转基因作物,并且使用了孟山都的“农达”专利除草剂。“我们过去用不了一滴农药就能杀死的小草,如今被转基因转成了对所有农药都刀枪不入的超级大草。”安德森是美国田纳西州西部的农民,从去年开始,他就开始为一种叫做长芒苋的杂草头疼。这种草每天可以长七八厘米,最高能长到两米多,把农作物全都盖在底下,见不到阳光。这种粗壮的杂草非常结实,收割机经常被它们打坏。
产生超级害虫美国转基因农田里还出现了“超级虫”。由于转基因作物并不针对次生害虫,这使得一些次生虫渐渐成为作物的主要害虫。而除虫剂让这些害虫有了抗药性,变成超级虫,农民虽然投入更多的药物治理虫害,却仍无济于事。美国国家科学院说:长期实践证明,所谓防虫害的转基因作物种植需要拿出农田的20%套种同类天然作物,以便让害虫“有饭吃”,避免它们成为抗体“超级害虫”。就是说,转基因作物不但没能防虫害、反而促使原本是小虫害的害虫变成“超级害虫”。
美国掩盖转基因危害的真相事实是,早在上世纪90年代初,美国食品和药物管理局(FDA)已经对转基因食品安全问题发出警告:转基因食品有内在的危险,并可能制造出难以检测的过敏、新的疾病和营养问题。它敦促美国政府相关部门做严格的长期测试。但是,白宫下令该机构促进生物技术发展。
美国应对转基因设置自己的安全底线但值得关注的是,不管如何支持转基因作物开发,美国政府从开始研制转基因开始就始终有个底线:严防转基因作物侵入现有的天然农业生产系统和天然食品供应系统。美国的天然农田面积远远超过转基因农田面积,而且,转基因农田大部分都是远离天然农业和与世隔绝的新开垦田地。
美国法律法规明确指示:要保障美国有足够质量和数量的天然农田战略储备,即:一旦造成巨大危害而不得不放弃转基因作物和现用农田,美国还有足够的天然农田养活全体美国居民。
更令人可怕的是 Epicyte是圣地亚哥的一家生物技术公司,2001年9月,该公司宣布创造了转基因玉米的终极版本------避孕玉米,这种杀精玉米是对世界人口问题的一大贡献
(美国链接文章:“中国人健康与食品安全:转基因粮食消灭精子… ”)
请大家特别看清楚,这个避孕玉米是种彻底赤裸裸的、公然直接用于所有动物绝育绝种的转基因玉米!是灭绝人口的超级战略武器!这种直接用于灭绝人口的超级武器十年前就诞生了!这十年来,所有各种各类的转基因作物发挥的一个共同作用 —— 就是对生命体的伤害和灭绝!对大自然生态平衡不可逆的破坏!
俄罗斯科学家的动物试验更是证实动物食用转基因食物后三代绝种
(链接文章:“[转载]俄证实:转基因使动物三代绝种”)2006年,俄罗斯科学院高级神经活动和神经生理研究所科学家伊琳娜?艾尔马科娃博士研究发现,食用转基因大豆食物的老鼠,其幼鼠一半以上在出生后头三个星期死亡,是没有食用转基因大豆老鼠死亡率的6倍。
(链接文章:“对比照片--食用转基因土豆老鼠肠胃中出现异… ”)
英国政府资助的研究显示,食用了转基因土豆的老鼠出现了肝脏癌症早期症状、睾丸发育不全、免疫系统和神经系统部分萎缩等异常现象,
山西省晋中市榆次地区的农民种植了转基因先玉335玉米后,地里和家里的老鼠都不见了,(链接文章:“老鼠绝迹——先玉335玉米种植以后做的调查 ”)
今年5月,记者在晋中8个村庄走访,进一步印证了刘旻所说的动物异常情况,并发现了当地另外的怪事:母猪产子少了,不育、假育、流产的情况比较多。村民张健红养了快10年猪,他说,以前他家养的20多头母猪,一窝猪最多能生16只,从来没有低过10只的。也就是在四年前,他发现母猪生的小猪越来越少。还有些生下来的小猪,看起来很健康,但生下来没过多久也死了。(链接文章:“转基因主粮的严重危害,在我国又一次大面积显现”)
除了老鼠和和猪以外,记者还在晋中发现了羊和狗出现异常的情况。杨村的一位养羊专业户介绍,以前母羊一胎能生两到三只,但是,现在只有一只,最多时两只。一名狗贩子也与记者聊起,现在狗经常出现肝腹水或者肾腹水的情况,剖开肚子总会有很多水。。
(链接文章:“转基因主粮的严重危害,在我国又一次大面积显现”)
中国男性的生育力正在下降:近四成男子精子质量不过关,精液异常!
广西19所高校的217例大学生志愿者的精液进行了质量分析,竟有56.7%的大学男生精液质量异常!
重庆:我市某大学20名男生相约去市计生研究院男性生育力监测中心,结果一半人的精液不合格!
浙江省首个精子库日前披露,该库一年来采集的精子86%质量不合格!
河南:已运行一年的河南人类精子库,近日传来令人震惊的消息:在以大学生为捐精主体捐献的精液中,竟然有80%质量不合格!
目前美国超市出售的食品,转基因食品可以不加标注,但天然食品或成分是天然原料的却可以给自己在显著位置加一个绿色食品的标志,美国人在超市基本上只买绿色食品,同样超市主要卖绿色食品,没有绿色食品标志的很少有人买。因为和美国人的收入比起来,食品消费占的比重是极低的,美国普通人吃的绿色食品标准比中国特供的绿色食品标准更严,
这就是美国运动员在北京不吃中国奥运村提供的食物的原因,这就是发达国家与发展中国家的区别。
自己直接粘贴就可以了!!!!
3我是一名生物教师.那些网站对于我们比较好呢,请赐教.
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呼吸道粘膜上的纤毛的清扫作用
基因工程的操作步骤(课件演示)
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29 乳糖操纵子的表达调控(1)
30 乳糖操纵子的表达调控(2)
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35 植物体细胞杂交过程
37 基因重组(可连续自动播放)
37 基因重组
39 基因的连接
40 基因的操作过程(全过程)
40 基因的操作过程(第四步)
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49 豚鼠胰脏腺泡分泌物形成过程.rar
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57 细菌的结构.rar
58 苏云金芽孢杆菌中的芽孢.rar
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72全国中学生生物竞赛各省市试题选编第一章:生命的物质基础
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生命的起源与生物的进化
绪论
第五节 植物的矿质营养
第一节 生物的生殖 一生殖的类型
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一章 第一节 组成生物体
4设计构建一个载体,将目的基因在植物根系表达并向根细胞外分泌.
先给你贴个东西你先看一下 希望对你有帮助
将特定的外源基因构建在植物表达载体中并转入受体植物,并不是植物遗传转化的最终目的.理想的转基因植物往往需要外源基因在特定部位和特定时间内高水平表达,产生人们期望的表型性状.然而,近二十年的发展历史却表明,外源基因在受体植物内往往会出现表达效率低、表达产物不稳定甚至基因失活或沉默等不良现象,导致转基因植物无法投入实际应用.另外,转基因植物的安全性问题已在许多国家引起人们的关注,例如,转基因有可能随花粉扩散,抗生素筛选标记基因有可能使临床上的某些抗生素失去作用等等.以上问题的出现使得植物基因工程这一高新技术正处于一种前所未有的困扰时期.针对这些问题,近几年人们对植物转基因技术进行了多方面的探索和改进,植物表达载体的改进和优化就是其中最重要的一项内容,本文就已经取得的进展进行综述.
1 启动子的选用和改造
外源基因表达量不足往往是得不到理想的转基因植物的重要原因.由于启动子在决定基因表达方面起关键作用,因此,选择合适的植物启动子和改进其活性是增强外源基因表达首先要考虑的问题.
目前在植物表达载体中广泛应用的启动子是组成型启动子,例如,绝大多数双子叶转基因植物均使用CaMV35S启动子,单子叶转基因植物主要使用来自玉米的Ubiquitin启动子和来自水稻的Actinl启动子.在这些组成型表达启动子的控制下,外源基因在转基因植物的所有部位和所有的发育阶段都会表达.然而,外源基因在受体植物内持续、高效的表达不但造成浪费,往往还会引起植物的形态发生改变,影响植物的生长发育.为了使外源基因在植物体内有效发挥作用,同时又可减少对植物的不利影响,目前人们对特异表达启动子的研究和应用越来越重视.已发现的特异性启动子主要包括器官特异性启动子和诱导特异性启动子.例如,种子特异性启动子、果实特异性启动子、叶肉细胞特异性启动子、根特异性启动子、损伤诱导特异性启动子、化学诱导特异性启动子、光诱导特异性启动子、热激诱导特异性启动子等.这些特异性启动子的克隆和应用为在植物中特异性地表达外源基因奠定了基础.例如,瑞士CIBA-GEIGY公司使用PR-IA启动子控制转基因烟草中Bt毒蛋白基因的表达,由于该启动子可受水杨酸及其衍生物诱导,通过喷酒廉价、无公害的化学物质,诱导抗虫基因在虫害重发生季节表达,显然是一个十分有效的途径.
在植物转基因研究中,使用天然的启动子往往不能取得令人满意的结果,尤其是在进行特异表达和诱导表达时,表达水平大多不够理想.对现有启动子进行改造,构建复合式启动子将是十分重要的途径.例如,Ni等人将章鱼碱合成酶基因启动子的转录激活区与甘露碱合成酶基因启动子构成了复合启动子,GUS表达结果表示:改造后的启动子活性比35S启动子明显提高.吴瑞等人将操作诱导型的PI-II基因启动子与水稻Actinl基因内含子1进行组合,新型启动子的表达活性提高了近10倍(专利).在植物基因工程研究中,这些人工组建的启动子发挥了重要作用.
2 增强翻译效率
为了增强外源基因的翻译效率,构建载体时一般要对基因进行修饰,主要考虑三方面内容:
2.1添加5‘-3‘-非翻译序列
许多实验已经发现,真核基因的5‘-3‘-非翻译序列(UTR)对基因的正常表达是非常必要的,该区段的缺失常会导致mRNA的稳定性和翻译水平显著下降.例如,在烟草花叶病毒(TMV)的126kDa蛋白基因翻译起始位点上游,有一个由68bp核苷酸组成的Ω元件,这一元件为核糖体提供了新的结合位点,能使Gus基因的翻译活性提高数十倍.目前已有许多载体中外源基因的5‘-端添加了Ω翻译增强序列.Ingelbrecht等曾对多种基因的 3‘-端序列进行过研究,发现章鱼碱合成酶基因的3‘-端序列能使NPTII基因的瞬间表达提高20倍以上.另外,不同基因的3‘-端序列增进基因表达的效率有所不同,例如,rbcS3‘-端序列对基因表达的促进作用比查尔酮合酶基因的3‘-端序列高60倍.
2.2 优化起始密码周边序列
虽然起始密码子在生物界是通用的,然而,从不同生物来源的基因各有其特殊的起始密码周边序列.例如,植物起始密码子周边序列的典型特征是AACCAUGC,动物起始密码子周边序列为CACCAUG,原核生物的则与二者差别较大.Kozak详细研究过起始密码子ATG周边碱基定点突变后对转录和翻译所造成的影响,并总结出在真核生物中,起始密码子周边序列为ACCATGG时转录和翻译效率最高,特别是-3位的A对翻译效率非常重要.该序列被后人称为Kozak序列,并被应用于表达载体的构建中.例如,有一个细菌的几丁质酶基因,原来的起始密码周边序列为UUUAUGG,当被修饰为ACCAUGG,其在烟草中的表达水平提高了8倍.因此,利用非植物来源的基因构建表达载体时,应根据植物起始密码子周边序列的特征加以修饰改造.
2.3对基因编码区加以改造
如果外源基因是来自于原核生物,由于表达机制的差异,这些基因在植物体内往往表达水平很低,例如,来自于苏云金芽孢杆菌的野生型杀虫蛋白基因在植物中的表达量非常低,研究发现这是由于原核基因与植物基因的差异造成了mRNA稳定性下降.美国Monsanto公司Perlak等人在不改变毒蛋白氨基酸序列的前提下,对杀虫蛋白基因进行了改造,选用植物偏爱的密码子,增加了GC含量,去除原序列下影响mRNA稳定的元件,结果在转基因植株中毒蛋白的表达量增加了30~100倍,获得了明显的抗虫效果.
3 消除位置效应
当外源基因被移人受体植物中之后,它在不同的转基因植株中的表达水平往往有很大差异.这主要是由于外源基因在受体植物的基因组内插入位点不同造成的.这就是所谓的"位置效应".为了消除位置效应,使外源基因都能够整合在植物基因组的转录活跃区,在目前的表达载体构建策略中通常会考虑到核基质结合区以及定点整合技术的应用.
核基质结合区(matrix association region,MAR)是存在于真核细胞染色质中的一段与核基质特异结合的DNA序列.一般认为,MAR序列位于转录活跃的DNA环状结构哉的边界,其功能是造成一种分割作用,使每个转录单元保持相对的独立性,免受周围染色质的影响.有关研究表明,将MAR置于目的基因的两侧,构建成包含MAR-gene-MAR结构的植物表达载体,用于遗传转化,能明显提高目的基因的表达水平,降低不同转基因植株之间目的基因表达水平的差异,减少位置效应.例如,Allen等人研究了异源MAR(来自酵母)和同源MAR(来自烟草)对Gus基因在烟草中表达的影响,发现酵母的MAR能使转基因表达水平平均提高12倍,而烟草本身的MAR能使转基因的表达水平平均提高60倍.使用来源于鸡溶菌酶基因的MAR也可起到同样作用.
另一可行的途径是采用定点整合技术,这一技术的主要原理是,当转化载体含有与寄主染色体同源的DNA片段时,外源基因可以通过同源重组定点整合于染色体的特定部位.实际操作时首先要分离染色体转录活性区域的DNA片段,然后构建植物表达载体.在微生物的遗传操作中,同源重组定点整合已成为一项常规技术,在动物中外源基因的定点整合已获得成功,而在植物中除了叶绿体表达载体可实现定点整合以外,细胞核转化中还很少有成功的报道.
4 构建叶绿体表达载体
为了克服细胞核转化中经常出现的外源基因表达效率低,位置效应及由于核基因随花粉扩散而带来的不安全性等问题,近几年出现的一种新兴的遗传转化技术--叶绿体转化,正以它的优越性和发展前景日益为人们所认识并受到重视.到目前为止,已在烟草、水稻、拟南芥、马铃薯和油菜(侯丙凯等,等发表)5种植物中相继实现了叶绿体转化,使得这一转化技术开始成为植物基因工程中新的生长点.
由于目前多种植物的叶绿体基因组全序列已被测定,这就为外源基因通过同源重组机制定点整合进叶绿体基因组奠定了基础,目前构建的叶绿体表达载体基本上都属于定点整合载体.构建叶绿体表达载体基本上都属于定点事例载体.构建叶绿体表达载体时,一般都在外源基因表达盒的两侧各连接一段叶绿体的DNA序列,称为同源重组片段或定位片段(Targeting fragment).当载体被导入叶绿体后,通过这两个片段与叶绿体基因组上的相同片段发生同源重组,就可能将外源基因整合到叶绿体基因组的特定位点.在以作物改良为目的的叶绿体转化中,要求同源重组发生以后,外源基因的插入既不引起叶绿体基因原有序列丢失,又不致于破坏插入点处原有基因的功能.为满足这一要求,已有的工作都选用了相邻的两个基因作为同源重组片段,例如rbcL/accD,16StrnV/rpsl2rps7,psbA/trnK,rps7/ndhB.当同源重组发生以后,外源基因定点插入在两个相邻基因的间隔区,保证了原有基因的功能不受影响.最近,Daniel等利用烟草叶绿体基因trnA和trnI作为同源重组片段,构建了一种通用载体(universal vector).由于trnA和trnI的DNA序列在高等植物中是高度保守的,作者认为这种载体可用于多种不同植物的叶绿体转化.如果这种载体的通用性得到证实,那么这项工作无疑为构建方便而实用的新型叶绿体表达载体提供了一个好的思路.
由于叶绿体基因组的高拷贝性,定点整合进叶绿体基因组的外源基因往往会得到高效率表达,例如McBride等人首次将Bt CryIA(c)毒素基因转入烟草叶绿体,Bt毒素蛋白的表达量高达叶子总蛋白的3%~5%,而通常的核转化技术只能达到0.001%~0.6%.最近,Kota等将Bt Cry2Aa2蛋白基因转入烟草转入烟草叶绿体,也发现毒蛋白在烟草叶子中的表达量很高,占可溶性蛋白的2%~3%,比细胞核转化高出20~30倍,转基因烟草不仅能抗敏感昆虫,而且能够百分之百地杀死那些产生了高抗性的昆虫.Staub等最近报道,将人的生长激素基因转入烟草叶绿体,其表达量竟高达叶片总蛋白的7%,比细胞核转化高出300倍.这些实验充分说明,叶绿体表达载体的构建和转化,是实现外源基因高效表达的重要途径之一.
5 定位信号的应用
上述几种载体优化策略主要目的是提高外源基因的转录和翻译效率,然而,高水平表达的外源蛋白能否在植物细胞内稳定存在以及积累量的多少是植物遗传转化中需要考虑的另一重要问题.
近几年的研究发现,如果某些外源基因连接上适当的定位信号序列,使外源蛋白产生后定向运输到细胞内的特定部位,例如:叶绿体、内质网、液泡等,则可明显提高外源蛋白的稳定性和累积量.这是因为内质网等特定区域为某些外源蛋白提供了一个相对稳定的内环境,有效防止了外源蛋白的降解.例如,Wong等将拟南芥rbcS亚基的转运肽序列连接于杀虫蛋白基因之前,发现杀虫蛋白能够特异性地积累在转基因烟草的叶绿体内,外源蛋白总的积累量比对照提高了10~20倍.最近,叶梁、宋艳茹等也将rbcS亚基的转运肽序列连接于PHB合成相关基因之前,试图使基因表达产物在转基因油菜种子的质体中积累,从而提高外源蛋白含量.另外,Wandelt等和Schouten等将内质网定位序列(四肽KDEL的编码序列)与外源蛋白基因相连接,发现外源蛋白在转基因植物中的含量有了显著提高.显然,定位信号对于促进蛋白质积累有积极作用,但同一种定位信号是否适用于所有的蛋白还有待于进一步确定.
6 内含子在增强基因表达方面的应用
内含子增强基因表达的作用最初是由Callis等在转基因玉米中发现的,玉米乙醇脱氢酶基因(Adhl)的第一个内含子(intron 1)对外源基因表达有明显增强作用,该基因的其他内含子(例如intron8,intron9)也有一定的增强作用.后来,Vasil等也发现玉米的果糖合成酶基因的第一个内含子能使CAT表达水平提高10倍.水稻肌动蛋白基因的第三个内含子也能使报道基因的表达水平提高2~6倍.至今对内含子增强基因表达的机制不不清楚,但一般认为可能是内含子的存在增强了mRNA的加工效率和mRNA稳定性.Tanaka等人的多项研究表明,内含子对基因表达的增强作用主要发生在单子叶植物,在双子叶植物中不明显.
由于内含子对基因表达有增强作用,Mcelroy等在构建单子叶植物表达载体时,特意将水稻的肌动蛋白基因的第一个内含子保留在该基因启动子的下游.同样,Christensen等在构建载体时将玉米Ubiquitin基因的第一个内含子置于启动子下游,以增强外源基因在单子叶植物中的表达.然而,有研究指出,特定内含子对基因表达的促进作用取决于启动子强度、细胞类型、目的基因序列等多种因素,甚至有时会取决于内含子在载体上的位置.例如,玉米Adhl基因的内含子9置于Gus基因的5‘端,在CaMV35S启动子调控下,Gus基因的表达未见增强;当把内含子置于Gus基因3端,在同样的启动子控制下,Gus基因的表达水平却增加了大约3倍.由此可见,内含子对基因表达的作用机制可能是很复杂的,如何利用内含子构建高效植物表达载体,目前还缺乏一个固定的模式,值得进一步探讨.
7 多基因策略
迄今为止,多数的遗传转化研究都是将单一的外源基因转入受体植物.但有时由于单基因表达强度不够或作用机制单一,尚不能获得理想的转基因植物.如果把两个或两个以上的能起协同作用的基因同时转入植物,将会获得比单基因转化更为理想的结果.这一策略在培育抗病、抗虫等抗逆性转基因植物方面已得到应用.例如,根据抗虫基因的抗虫谱及作用机制的不同,可选择两个功能互补的基因进行载体构建,并通过一定方式将两个抗虫基因同时转入一个植物中去.王伟等将外源凝集素基因和蛋白酶抑制剂基因同时转入棉花,得到了含双价抗虫基因的转化植株.Barton等将Bt杀虫蛋白基因和蝎毒素基因同时转入烟草,其抗虫性和防止害虫产生抗性的能力大为提高(专利).在抗病方面,本实验室蓝海燕等构建了包含β-1,3-葡聚糖酶基因及几丁质酶基因的双价植物表达载体,并将其导入油菜和棉花,结果表明,转基因植株均产生了明显的抗病性.最近,冯道荣、李宝健等将2~3个抗真菌病基因和hpt基因连在一个载体上,两个抗虫基因与bar基因连在另一个载体上,用基因枪将它们共同导入水稻植株中,结果表明,70%的R.代植株含有导入的全部外源基因(6~7个),且导入的多个外源基因趋向于整合在基因组的一个或两个位点.
一般常规的转化,尚不能将大于25kb的外源DNA片段导入植物细胞.而一些功能相关的基因,比如植物中的数量性状基因、抗病基因等,大多成"基因簇"的形式存在.如果将某些大于100kb的大片段DNA,如植物染色体中自然存在的基因簇或并不相连锁的一系列外源基因导入植物基因组的同一位点,那么将有可能出现由多基因控制的优良性状或产生广谱的抗虫性、抗病性等,还可以赋予受体细胞一种全新的代谢途径,产生新的生物分子.不仅如此,大片段基因群或基因簇的同步插入还可以在一定程度上克服转基因带来的位置效应,减少基因沉默等不良现象的发生.最近,美国的Hamilton和中国的刘耀光分别开发出了新一代载体系统,即具有克隆大片段DNA和借助于农杆菌介导直接将其转化植物的BIBAC和TAC.这两种载体不仅可以加速基因的图位克隆,而且对于实现多基因控制的品种改良也会有潜在的应用价值.目前,关于BIBAC和TAC载体在多基因转化方面的应用研究还刚刚开始.
8 筛选标记基因的利用和删除
筛选标记基因是指在遗传转化中能够使转化细胞(或个体)从众多的非转化细胞中筛选出来的标记基因.它们通常可以使转基因细胞产生对某种选择剂具有抗性的产物,从而使转基因细胞在添加这种选择的培养基上正常生长,而非转基因细胞由于缺乏抗性则表现出对此选择剂的敏感性,不能生长、发育和分化.在构建载体时,筛选标记基因连接在目的基因一旁,两者各有自己的基因调控序列(如启动子、终止子等).目前常用的筛选标记基因主要有两大类:抗生素抗性酶基因和除草剂抗性酶基因.前者可产生对某种抗生素的抗性,后者可产生对除草剂的抗性.使用最多的抗生素抗性酶基因包括NPTII基因(产生新霉素磷酸转移酶,抗卡那霉素)、HPT基因(产生潮霉素磷酸转移酶,抗潮霉素)和Gent基因(抗庆大霉素)等.常用的抗除草剂基因包括EPSP基因(产生5-烯醇式丙酮酸莽草酸-3-磷酸合酶,抗草甘磷)、GOX基因(产生草甘膦氧化酶、降解草甘膦)、bar基因(产生PPT乙酰转移酶,抗Bialaphos或glufosinate)等.
上面这些当中1、2、3、5、6都是值得注意的,特别是5,因为你要向细胞外分泌.骨架载体可以选择PB I121,然后你可以在上面改动基因型.
后面的就是克隆的步骤了,相对简单.
1 首先获得目的基因加酶切位点,连入改好的载体中.
2 将质粒转入大肠杆菌DH5a扩增
3 将扩增好的质粒转入植物细胞内进行表达
4 收集根细胞外培养基检测是否有该蛋白的表达和分泌.
至于改造载体那几个步骤要是答题的话简单说说就可以了,毕竟如果真的做出一个好载体都可以自己开公司了.
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